Servicio de Cultivo de Tejidos

 INSTALACIONES:

El Servicio de Cultivo de Tejidos dispone de instalaciones en el Campus de Espinardo (edficio SACE) y en el Campus de Ciencias de la Salud (edificio LAIB). 

El desarrollo de cultivos de células y tejidos de origen animal requiere trabajar bajo niveles de contención biológica 2 (NCB2), lo que implica no sólo las características de las instalaciones, sino también un código de prácticas y procedimientos que deben comprometerse a cumplir quienes trabajen en este tipo de laboratorios.

El trabajo en las instalaciones y el modo de acceso a las mismas se encuentra especificado en la "Guia del usuario del SCT" y los usuarios que trabajen en las instalaciones se comprometen a respetar las normas de funcionamiento del Servicio, en especial las relativas a bioseguridad.

Las instalaciones del SCT cuentan con los requisitos de confinamiento necesarios para el desarrollo de actividades que requieren un nivel 2 de contención biológica (laboratorios NCB2). Las instalaciones del edificio SACE cuentan, además, con la autorización del  Consejo Interministerial de  Organismos Modificados Genéticamente (CIOMG) para el desarrollo de determinadas actividades que utilizan OMG tipo 1 y 2  y que han sido notificadas. Sin embargo, hay que tener en cuenta que aunque las instalaciones cumplen con los requisitos de confinamiento necesarios para el desarrollo de este tipo de actividades, para llevar a cabo cualquier nueva actividad, ésta deberá ser previamente comunicada a la autoridad competente.

Edificio SACE (Campus de Espinardo)	Edificio LAIB (Campus de Ciencias de la Salud)
Laboratorio de cultivo de células animales (laboratorio A)	Laboratorio de cultivo de células animales
Laboratorio de cultivo de células animales (laboratorio B)	Laboratorio de citometría de flujo
Laboratorio de citometría de flujo	Laboratorio de preparacion de medios y reactivos
Laboratorio de preparación de medios y reactivos	Laboratorio de limpieza, esterilización y reciclado de material
Laboratorio de limpieza, esterilización y reciclado de material	Sala de congeladores y sala fría (zona común)

Estas instalaciones se complementan con:

• Laboratorios para trabajar con radiactividad y cultivos celulares. Estos laboratorios pertenecen a la Sección de Radioprotección y Residuos del ACTI y se encuentran situados en sus instalaciones,  junto al Servicio de Cultivo de Tejidos, tanto en el Campus de Espinardo (SACE), como en el Campus de Ciencias de la Salud (LAIB).

 Para utilizar estas instalaciones debe contactar con la Jefa de la Sección de Radioprotección y Residuos.

B) INSTRUMENTACIÓN :

• Cabinas de seguridad biológica y de filtración de gases
• Microscopios
• Incubadores
• Centrífugas
• Crioconservación
• Citometría de flujo y separación celular 
• Lectores de placas

   Seahorse XFe96 (Plataforma de análisis metabólico en células vivas en tiempo real) 

• Sistema MAGPIX (Ensayos Multiplex)
• Otros equipos
• Suministro de Hielo seco 

Cabinas de Seguridad Biológica (CSB) y de filtración de gases

(Todas las cabinas se cualifican anualmente por un empresa acreditada)

El equipamiento de estas cabinas se completa con pipeteadores automáticos con y sin cable, bombas de aspiración, esterilizadores de material metálico por calor seco con bolas de vidrio (K-MIDT HBS 920),  etc.

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Microscopios

Los microscopios se completan con:

•  Fuente de iluminación de luz fría

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Incubadores

El equipamiento de los incubadores se completa con:

• Unidad intercambiadora de gas, que asegura el suministro de gases a los incubadores, realizando un cambio automático de las botellas de CO₂ cuando una de ellas se agota.
• Medidor de CO₂. Con él se controla el funcionamiento de los incubadores midiendo el porcentaje de CO₂ en la cámara interior.

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Centrífugas

Todas las centrífugas disponen de rotores o adaptadores con tapa.

Centrífuga de alta velocidad marca "Beckman Coulter". Mod. Avanti J-26 XPI  

26.000 r.p.m., 81.800 xg de fuerza centrífuga máxima. Rango de Tª de trabajo de 10°C a 40°C en incrementos de 1 ºC. Tiempo de centrifugación de1 min to 99 hr 59min, W2t or continuo.

Equipada con:

• Rotor de ángulo fijo (34º) de titanio mod. JA-30.50 Ti.

Velocidad máxima de 26.000 r.p.m. y fuerza centrífuga máxima de 81.800 xg, para  8 tubos de 50 mL., con una capacidad total del rotor de 400 mL.

• Rotor basculante tipo JS-24.15. Velocidad máxima de 10.000 r.p.m. (19.200 xg). Para 6 tubos de 15mL.

• Rotor de ángulo fijo (25º) tipo JA-10. Velocidad máxima de 10.000 r.p.m. (17.700 xg). Capacidad máxima de 3 L. en 6 botellas de 500 mL.

Centrífugas refrigeradas marca "HERAEUS" mod. MINIFUGE T, y MULTIFUGE 1L-R

• rango de tiempo programable de 0 a 99 horas
• rango de temperatura: -10 a 36ºC
• RCF max. 6200 xg (9 niveles de aceleración y 10 de frenado)
• adaptadores con tapa para tubos de 5, 12 y 50 mL 
• adaptador para placas

Centrífuga refrigerada marca "HERAEUS" mod. Megafuge 1.0R. 

Equipada con:

• citorrotor, con el que se convierte en una citocentrífuga, permitiendo realizar extensiones en portaobjetos a partir de suspensiones celulares (RCF max. 3220 xg). 
• microrrotor, con el que se convierte en una microcentrífuga que permite centrifugar hasta 24 tubos tipo Eppendorf hasta 15.000 r.p.m.(RCF max. 20120 xg). Posee reductores para tubos de 1 y 0,5 ml. rotor basculante con adaptadores cerrados y esterilizables en autoclave (RCF max. 3020 xg).

Centrífuga para tubos Eppendorf marca "Beckman" mod. Microfuge R.

• Rotor con tapa. Con capacidad para 18 tubos.
• Velocidad máxima de 15.000 r.p.m. (20.937 xg). Rango de Temperatura de –20 a 40 ºC.

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Crioconservación

• Crioconservadores (Depósitos de nitrógeno líquido):
  • para el almacenamiento de muestras en nitrógeno líquido de 21, 40, 60, 80 y 184 litros de capacidad. Software auditable "Pro-curo" para la gestión y control de las muestras custodiadas.
  • para el transporte de muestras. (2 y 20 litros), a disposición de los usuarios que lo soliciten.
• Sistema de transferencia de nitrógeno líquido para el relleno de tanques

• Congeladores: Los congeladores (*) disponen de un sistema de aviso por alarma telefónica en caso de variación de la temperatura por encima del límite establecido.

• Suministro de hielo seco  

(Sistema de producción en pastillas). En el edificio SACE  

El Servicio de Cultivo de Tejidos facilita la fabricación de  hielo seco en forma de pastillas de 200g de peso (7 cm de diámetro x 7 cm de altura).

En el caso de consumos superiores a 4 pastillas debe avisar con antelación en el teléfono 7157.

Tarifa

Citometría de flujo y separación celular (Sorting)

La citometría de flujo permite permite realizar medidas rápidas en partículas suspensión (células, núcleos, cromosomas…) que fluyen hacia un punto donde se realizan la medida simultánea de diversos parámetros ópticos (dispersión frontal y lateral de la luz y fluorescencia de diferentes longitudes de onda). Algunos equipos permiten además separar físicamente células o partículas identificadas durante el análisis y recuperar en tubos separados subpoblaciones homogéneas que presentan una propiedad específica a partir de una población compuesta por distintos tipos celulares. Se pueden cuantificar las señales correspondientes a la absorción, y la emisión de fluorescencia (propia o adquirida por fluorocromos). Los datos obtenidos son almacenados y analizados con la ayuda de un ordenador y una serie de programas informáticos especialmente diseñados para ello.

Aplicaciones

Sus aplicaciones son muy amplias ya que se estiman directamente diversos parámetros celulares. Además de medir la absorción y dispersión de la luz a diferentes ángulos que permiten aplicaciones particulares (tamaño, complejidad o granularidad) se pueden realizar otras medidas basadas en sondas químicas (fluorocromos) o inmunológicas (anticuerpos monoclonales) acoplados directa o indirectamente a fluorocromos para poner de manifiesto macromolélulas celulares. Se aplica al estudio cualitativo y cuantitativo de constituyentes celulares (ARN, proteínas, cromosomas, mitocondrias, enzimas, receptores…). Se pueden realizar medidas de actividad enzimática, flujo de calcio, potencial de membrana o pH, viabilidad, citotoxicidad, efectos de drogas o antimicrobianos, permitiendo medir propiedades de cientos de células individualmente, en lugar de establecer una media sobre una población completa. El contenido de ADN es uno de los parámetros más analizados. Se trata de un marcador de la ploidia y de la situación de las células en las diferentes fases del ciclo celular, permitiendo asimismo el cálculo del índice de ADN.

El Servicio de Cultivo de Tejidos cuenta con un citómetro de flujo con capacidad para separar físicamente diferentes tipos celulares (Cell Sorter) y siete analizadores, cuyas características son las siguientes:

(*) "Cell Sorter" (SONY SH800Z):  Equipo Financiado por la Fundación Cultural Privada Esteban Romero en 2015. 

 Lectores de placas: espectrofotómetros, fluorímetros, luminómetros

Sistema MAGPIX (Ensayos Multiplex)

Edificio LAIB  (Campus de la Salud)

MAGPIX® Permite la realización de inmunoanálisis basados en la tecnología Luminex™ xMAP™ para la cuantificación y la detección simultánea de distintas proteínas (citocinas, quimiocinas, factores de crecimiento, etc.)

Otros equipos

Osmómetros (edificios SACE y LAIB)

Edifico SACE: "Wescor mod. Vapro 5520" 

Edificio LAIB: "Wescor mod. Vapro 5600"  

Determinan la osmolaridad de la muestra a temperatura ambiente por presión de vapor. Portamuestras para medir volúmenes de 2 y 10 microlitros. Rango de medida de 20 a 3200MMOL/KG

Contador, analizador de tamaño de células y partículas (Coulter Z2). 

Se encuentra en el edificio SACE

Sistema para el recuento y distribución por tamaño de células y partículas en suspensión. Rango de medida entre 1 y 120 micras. Volumen de medida inferior a 1 ml. Resultados en forma de contaje total o concentración. Proporciona una distribución de la población por tamaño en gráficos o tablas, incluyendo funciones estadísticas.

Contador automático de células (edificio SACE)

Biorad TC10 y TC20

(funcionamiento   )

Electroporador (edificio SACE)

Biorad, mod Gene pulser Xcell.  

Sistema de electroporación para bacterias y células eucarióticas, incluyendo células de mamíferos y protoplastos de plantas. Generación de pulso eléctrico de caída exponencial y/o onda cuadrada.

Sistema para medir resistencia eléctrica a través de membranas (edificio SACE)

Millicell®ERS-2

Sistemas de fotografía digital (edificios SACE y LAIB)

Permiten la realización y procesamiento de fotografías digitales, así como la observación en tiempo real de la muestra colocada en la platina de los microscopios desde cualquier ordenador conectado a la red de la UMU. También disponen de funciones adicionales como medición de distancias, calibración y otras. Disponibles en microscopios invertidos Leica, Nikon y Zeiss (ver apartado "microscopios").

Irradiador UV (edificio SACE)

Crosslinker Bio-Link® BLX

Baño con agitación (edificios SACE y LAIB)

Baños termorregulados con agitación Memert WNB 29

Sonicador (edificio SACE)

marca Labsonic L.

Potencia y tiempo regulables. Sondas de titanio de 4 y 19 mm (200w). Cabina de insonorización.

Equipamiento Básico (edificios SACE y LAIB)

• Sistema de producción de agua ultrapura y apirógena (Tipo I). Millipore 
• Autoclaves, estufa de esterilización, sistemas de filtración, agitadores rotatorios (para placas, matraces, etc. de r.p.m. regulable y programable), bombas peristálticas y de vacío-presión, pHmetros, balanzas de precisión, etc.
• pHmetro Crison: dispone de un microelectrodo de 3 mm de diametro y 5 mm de inmersión mínima.
• Desinfectador de manos y guantes